成体表皮干细胞的分离培养与鉴定

      目的  探讨成体表皮干细胞体外分离、培养和鉴定的技术方法,为组织工程皮肤的构建提供种子细胞.

      方法  通过中性蛋白酶消化成人包皮获得表皮细胞,再通过胰蛋白酶与乙二胺四乙酸(EDTA)消化并制成单个表皮细胞悬液,接种至人胎盘Ⅳ型胶原包被的培养瓶内,以Dulbecco改良Eagle培养基/F12(DMEM/F12,1∶1)作为表皮干细胞培养基置培养箱内培养,37 ℃静置10～15 min,留用快速贴壁细胞继续培养,所得细胞分别以能否呈克隆状生长、流式细胞仪测细胞周期、透射电镜观察其超微结构及β1-整合素、角蛋白19(K19)免疫细胞化学染色进行鉴定.

      结果  人胎盘Ⅳ型胶原包被的培养瓶内快速贴壁细胞继续培养24 h后细胞呈克隆状生长;电镜观察其超微结构示非成熟细胞特征;细胞周期分析示,第2代中静息期/DNA合成前期(G0/G1期)细胞占86.83%.β1-整合素、K19免疫细胞化学染色呈阳性.

      结论  成体表皮干细胞在体外得到成功分离与培养.

      引用格式   谢晓繁，贾赤宇，付小兵，等. 成体表皮干细胞的分离培养与鉴定.中国危重病急救医学，2006，18（1）：46-48.

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